摘要:目的 对ADVIA2120全自动血细胞分析仪测定网织红细胞的性能进行评价。 方法 用ADVIA2120全自动血细胞分析仪测定高、中、低值网织红细胞样本，进行重复性、携带污染率及稳定性测试，并与手工计数结果比较。取高值样本在技术指标范围内按比例稀释后测定各浓度，进行线性评价。 结果 重复性:低值指标高核酸浓度网织红细胞比率CV值较大（13.82%～17.4%），其它各项指标的CV均<8.19%;线性r=0.9989;稳定性显示，4℃低温24h内网织红细胞百分率计数CV为3.8%;携带污染率为0.22%;与手工法百分率结果比较，相关性好（r=0.9962），差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 ADVIA2120全自动血细胞分析仪测定网织红细胞携带污染率低、重复性、稳定性、线性好，能满足临床需要，可替代手工计数，但不能区分疟原虫感染引起的干扰。
关键词:网织红细胞;全自动血细胞分析仪;疟原虫
Evaluation of performance of ADVIA2120blood-counter system for detection of reticulocytes.
XU Rui，LIAO Chun-sheng.
（Laboratory Center ZhuHai Branch of GuangDong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine.（ZHUHAI，519015）
Abstract:Objective To evaluate the performance of ADVIA2120for the test of reticulocytes. Methods ADVIA2120was used for detection of high/normal/low reticulocyte samples and the reproducibility，the rate of carrying contamination and stability were observed.The results were compared with manual method. Results Reproducibility:except that the CV of high nucleic acid was13.82%～17.4%，the CV of the other indexes was less than8.19%;linearty:r=0.9979;stability:percentage CV of Ret at4℃in24hwas3.8%;the rate of carrying contamination was0.22%;compared with the manual methods:r=0.9962，P>0.05. Conclusion The srate of carrying contamination by using ADVIA2120blood-counter system in test of reticulocytes is low，stable and showing a nice linear correlation suitable for clinical use.
Key words:Reticulocytes;Automatic blood-counter system;Plasmodium
网织红细胞（Reticulocytes，Ret）传统的人工测定烦琐而费时，准确性受操作人员的经验、水平、细胞计数量、染色效果及涂片质量等因素影响大，重复性也差。全自动血细胞分析仪测定网织红细胞应用逐渐增多，因临床应用时间不长，其性能尚有待观察。ADVIA2120全自动血细胞分析仪是拜耳公司新推出的五分类机型，配备全自动网织红细胞分析功能，可提供14项相关参数，因部份指标临床意义尚无确论，故本文仅选择6项与细胞数量相关的指标进行评价。现进行重复性、线性、携带污染率、稳定性测试，并与手工百分率分类结果进行比较，报道如下。
1 资料与方法
1.1 资料
1.1.1 标本来源 住院患者，网织红细胞按仪器初步测量结果分为高、中、低三类。
1.1.2 设备 美国ADVIA2120全自动血细胞分析仪、日本OLYMPUSBX-60多功能光学显微镜、上海医疗设备厂HH-W21-600电热恒温水育箱、姜堰康健医疗器具有限公司KJRM-1摇匀器。
1.1.3 ADVIA2120全自动血细胞分析仪原装配套试剂及全血质控品（批号0605204）;珠海贝索公司网织红细胞染液和瑞氏染液，按试剂使用说明操作。广州阳普公司EDTA-K2血常规抗凝管（批号0602012）。
1.2 方法 按相关评价原则，ADVIA2120全自动血细胞分析仪重复测定样本，评价仪器日内精密度、日间精密度、线性、携带污染率和稳定性，测定前摇匀器正、反向摇动3min。
1.2.1 日内精密度 按美国临床实验室标准化委员会（NC-CLS）制定的方案 ［1］ ，选择本院住院患者血样，网织红细胞按仪器初步测量结果分为高、中、低三类，各1份，每份重复测定10次，并计算平均值（x）和变异系数（CV）。
1.2.2 日间精密度 因临床血标本稳定性差，故以原厂全血质控品每日9:00、12:00、16:30测定三次，取均值，连续测定10d，并计算平均值（x）和变异系数（CV）。
1.2.3 线性评价 按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）制定的线性验证方案EP6-A ［2］ ，选择一份网织红细胞细胞高值样本，在技术指标范围内做比例稀释，仪器测定各浓度2次，取均值，所得数据进行回归分析。
1.2.4 携带污染率 按国际血液学标准化委员会制定的程序 ［3］ ，将高值样本连续测定3次（H 1 、H 2 、H 3 ），紧接着连续测定低值样本3次（L 1 、L 2 、L 3 ），携带污染率结果为［（L 1 ～L 3 ）/（H 3 -L 1 ）］×100%。
1.2.5 稳定性试验 因血样皆为低温保存，考虑温度为主要影响因素。取一份血样分为3管，放置于4℃冰箱。分别于0min、15min、30min、45min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、24h、48h、72h每个时间点测定3次，取均值。
1.2.6 相关性评价 按NCCLS H20-A1 ［4］ 文件，将30份标本制作3张血片，2名有经验的主管技师随机各选一张，双盲法计数网织红细胞百分率 ［5］ ，取均值后与仪器测定结果进行相关性比较。
1.3 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件进行配对t检验和回归分析。
2 结果
2.1 日内精密度测试 高值项目日内精密度较好，低值项目高核酸浓度网织红细胞比率（%）日内精密度偏大。见表1。
表1 ADVIA2120网织红细胞测定日内精密度（略）
2.2 日间精密度测试 高值项目日间精密度较好，低值项目高核酸浓度网织红细胞比率（%）日精密度偏大。见表2。
表2 ADVIA2120网织红细胞测定日间精密度（略）
2.3 线性评价 初始计数为0.38×10 12 /L的样本按比例稀释后理论结果为（0.304、0.228、0.152、0.076、0.038）×10 12 /L，实际测定结果为（0.298、0.231、0.148、0.063、0.033）×10 12 /L，得回归曲线y=1.0225x-0.0086，相关系数r为0.9989，P>0.05。（见图1）
2.4 携带污染率 高值样本3次测定结果分别为H 1 =0.64×10 12 /L、H 2 =0.67×10 12 /L、H 3 =0.65×10 12 /L，低值样本3次测定结果分别为L 1 =0.03×10 12 /L、L 2 =0.03×10 12 /L、L 3 =0.02×10 12 /L，携带污染率0.22%。稳定性试验:4℃冷藏后测定，百分率结果均值分别为6.42%（0min）、6.18%（15min）、6.27%（30min）、6.19%（45min）、6.33%（1h）、6.22%（2h）、6.34%（3h）、6.28%（4h）、6.21%（5h）、6.35%（6h）、6.37%（7h）、6.25%（24h）、5.68%（48h）、5.21%（72h），结果显示24h内网织红细胞百分率变化无统计学意义（P>0.05），48h后网织红细胞百分率降 低，变化有统计学意义（P<0.05），1d内网织红细胞百分率CV1.3%，24h内网织红细胞百分率CV3.8%。相关性评价:AD-VIA2120全自动血细胞分析仪网织红细胞细胞百分率测定与手工涂片分类法百分率结果的相关性好（r=0.9962，图2），配对t检验差异无统计学意义（P>0.05）。
图1 ADVIA2120全自动血细胞分析仪网织红细胞线性评估（略）
图2 网织红细胞ADVIA2120测定与手工法测定相关性（略）
3 讨论
网织红细胞测定在各种贫血的鉴别诊断、疗效观察、肿瘤患者放、化疗后骨髓造血功能评估等有着重要的临床意义，及时、准确的网织红细胞测定有利于动态了解骨髓红系增生情况。ADVIA2120全自动血细胞分析仪网织红细胞测定原理是先用戊二醛和十二烷基硫酸钠将红细胞球形化并固定，氧氮杂芑750使RNA染蓝色，着色程度与RNA含量成正比，细胞通过FLOWCELL在激光照射下产生散射，应用MIE原理，得到网织红细胞的14项测量参数和计算参数，因对网织红细胞血红蛋白浓度分布宽度、血红蛋白含量分布宽度等指标临床意义尚无确论，故仅选择6项与细胞数量相关指标进行评价。
从结果看，ADVIA2120全自动血细胞分析仪网织红细胞测定具有良好的精密度，除高核酸浓度网织红细胞比率因计数值较低，故cv值在日内和日间偏大外（13.82%～17.4%），其它项目cv值在1.18%～8.19%之间，处于理想范围之内。稳定性测试表明4℃24h内网织红细胞百分率结果稳定，结果的差异无统计学意义（P>0.05，CV3.8%），48h后网织红细胞百分率降低。低温虽能减缓红细胞新陈代谢，但网织红细胞向成熟红细胞的转化未完全停止，时间过长导致RNA降低的比率增高并出现统计学意义（P<0.05）。仪器线性良好（r=0.9989，P>0.05，图1），携带污染率低（0.22%），达到临床应用要求。与手工法的百分率结果比较相关性佳（r=0.9962，P>0.05，图2），考虑到仪器法检测细胞数量大，可有效避免细胞在血片分布上的统计学误差，特别是低值测量结果，因此仪器法应更为理想。临床应用中遇1例疟疾患者样本，入院仪器查血色素68g/L，RBC2.23×10 12 /L，网织红细胞计数0.32×10 12 /L，网织红细胞百分率14.35%，经外周血片瑞氏染色，感染虫体之RBC为10.3%（计数1000个RBC），抗疟治疗3周后查血色素85g/L，RBC3.03×10 12 /L，网织红细胞计数0.08×10 12 /L，网织红细胞百分率2.64%，外周血片瑞氏染色未查见虫体和受染RBC。文献报道受疟原虫感染的RBC中RNA含量是增加的 ［6］ ，那受染RBC在RNA增高时是否归为网织红及RNA不高时如何区分则缺乏妥善的处理办法。在手工煌焦油蓝活体染色、ADVIA2120的氧氮杂芑750染色及sysmex2100的荧光染色不能分辨的情况下，对疟疾血样做外周血片瑞氏染色，计数受染细胞比例，可大致判定干扰程度。
总体而言，ADVIA2120全自动血细胞分析仪网织红细胞测定避免了传统手工法的诸多缺点，如肉眼判读的主观性、细胞的分布误差、检测的低效率等问题，在全血分析时可根据情况随时选择加做网织红分析，无需再取血样，其便利性和高效性是手工法无可比拟的，加之重复性、稳定性、准确性及携带污染率各指标均符合临床应用要求，在有条件的医院全自动仪器法测定网织红细胞是很好的选择。
参考文献:
［1］Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:A Sta-tistical Approach;Approved Guideline.NCCLS document EP9-A2，2002.
［2］Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:A Sta-tistical Approach;Approved Guideline.NCCLS document EP6-A.Vol.23，2003.
［3］ Protocol for evaluation of automated hematology analyzer.ICSH.Clin Lab Heamotal，1984，6:69.
［4］Reference leukocyte differential count（Proportional）and evaluation of in-strument methods，NCCLS document H20-A，vol12，1992.
［5］叶应妩，王毓三，主编.临床检验操作规程.第2版.南京:东南大学出版社，1997.
［6］曾素根，贾永前，周静等.红细胞内疟原虫对仪器法检测网织红细胞的影响.中华检验医学杂志，2005，9:964.
