| 作者：袁文丹，高峰，陈金荣，刘丽，王国祥 【摘要】 目的 研究免疫抑制剂对小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage ，M)的损伤作用机制。方法 以小鼠腹腔巨噬细胞为对象，采用小鼠尾静脉注射地塞米松0.15mg/只，环磷酰胺2.0mg/只，小鼠腹腔巨噬细胞培养，检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及腹腔灌洗液中NO2-/NO3-浓度并用形态学方法观察比较免疫抑制剂对小鼠腹腔巨噬细胞的损伤特点。结果 地塞米松和环磷酰胺均能抑制巨噬细胞功能，与对照组比，细胞吞噬功能均显著下降（P<0.01），DEX组腹腔灌洗液中NO2-/NO3-浓度显著升高，Cy组不升高。VitC为自由基链反应阻断剂，阻断过氧化链式反应可减轻损伤，可使DEX组细胞吞噬功能获得部分恢复。结论 推测环磷酰胺对腹腔巨噬细胞损伤是以直接损伤染色体而DEX以氧化损伤为主。 【关键词】 地塞米松 环磷酰胺 巨噬细胞 The effect of dexamethasone and cyclphosphamide on peritoneal macrophage of mice
【Abstract】 Objective We investigated demage mechanism of peritoneal macrophage(M) induced by injection of dexamethasone and cyclophosphamide in mice.Methods The immune function by determining the phagocytic function and structure of the macrophagocytes of the abdominal cavities of mice in vitro. The phagocytosis of peritoneal macrophages was evaluated by chicken erythrocytes method; Observed the concentratuon of NO-2/NO-3 in the peritoneal lavage fluid.Results Dexamethasone and cyclophosphamide induced the apoptosis of peritoneal macrophage and concomitant decrease of phagocytosis(vs control group，P<0.01)， the concentratuon of NO-2/NO-3 in the peritoneal lavage fluid significantly increased after dexamethasone injection;VitC(inhibitor of iNOS and inhibitor of reactive oxygen species) prevented the apoptosis of peritoneal macrophage and reduced the concentration of NO-2/NO-3 in the peritoneal lavage fluid after the effect of dexamethasone.Conclusion These evidences support that NO and active oxygen species may be involved in the apoptosis process of peritoneal peritoneal macrophage induced by dexamethasone in mice. 【Key words】 dexamethasone cyclophosphamide macrophage 地塞米松和环磷酰胺在临床肿瘤的治疗中是常用的药物，在杀伤肿瘤细胞的同时又会引起免疫系统损伤，而影响治疗效果。巨噬细胞(macrophage，M)是机体免疫体系中重要的免疫效应细胞，具有非特异性直接清除各种异物，杀伤病原体和肿瘤细胞的功能，并具有抗原提呈作用。本实验选用小鼠腹腔巨噬细胞进一步探讨在整体条件下地塞米松和环磷酰胺对免疫功能影响的机制。 1 材料和方法 1.1 实验分组及动物处理 昆明种雄性小鼠，日龄55～58天。60只分为5组：正常对照组；DEX组：腹腔注射地塞米松（Dexa）150μg/只，每日1次，连续注射3次；Cy组：腹腔注射环磷酰胺（Cy）1.5mg/只，每日1次，连续注射3次；VitC+DEX组：与DEX组同时注射；VitC+Cy组：与Cy同时注射；给药第2天上述小鼠腹腔注射2%无菌淀粉1ml。 1.2 腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定 于第4天取各组6只，小鼠腹腔注射5%鸡红细胞1ml，30min后，引颈处死小鼠，腹腔注射D-HanKs 1ml，轻轻按揉腹壁1min，吸出腹腔液滴片。置37°C湿盒孵育30min后，用PBS冲洗，去除未贴壁M和游离鸡红细胞，1：1丙酮-甲醇固定7～8min，自然晾干。有姬母萨-瑞士染液进行染色，油镜下计数M和M吞噬CRBC数。用下列公式计算吞噬百分率和吞噬指数：吞噬百分率（%）=吞噬鸡红细胞的M/100个M（吞和未吞的）×100% 吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/100个M。 1.3 细胞涂片Giemsa染色 各组小鼠第4天引颈处死，腹腔注射D-Hanks液5ml，吸出腹腔液4℃ 500r/min，去上清与PBS制成细胞悬液，调细胞为1×106个/ml，100μl涂片，凉干后甲醇固定，晾干Giemsa染色，普通光镜下观察细胞形态变化。 1.4 腹腔巨噬细胞NO检测 NO2-/NO3-的测定按NO试剂盒（酶法）说明书操作，最后测定500nm吸光度值。NO2-/NO-3（μmol/L）=（样品管吸光度空白管吸光度）/（标准吸光度空白管吸光度）。 2 实验结果 所有数据均采用单因素方差分析法进行统计学分析，并采用Student-NK检验法进一步检验。腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定结果见表1。DEX和Cy注射组小鼠M的吞噬百分率和吞噬指数均明显降低，与生理盐水对照组比较具有高度统计学意义（P<0.01）;VitC+DEX组M的吞噬百分率和吞噬指数比DEX组有显著提高（P<0.01）；VitC+Cy组M的吞噬百分率和吞噬指数较Cy组差异无显著性（P>0.05）。形态学变化可见：DEX组和Cy组较对照组出现明显形态变化细胞变小，染色质凝聚，细胞质浓缩，可见凋亡小体。 腹腔巨噬细胞NO检测结果见图1：小鼠腹腔灌洗液中NO浓度测定显示：与对照组比，DEX组NO2-/NO-3浓度显著上升（P<0.01），而VitC能部分逆转NO浓度（P<0.01），但对Cy组无明显改善（P>0.05）。 表1 腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定结果
注：①与对照组比较，P<0.01;②与对照组比较，P<0.01;③与DEX组比较，P<0.01；④与Cy组比较，P>0.05 |
