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【摘要】 目的 探讨糖尿病引发的中枢神经系统损伤的机制。方法 采用糖尿病大鼠模型，于60天后取脑组织切片，用免疫组化的方法检测NF-κB，并进行图像分析。结果 糖尿病大鼠海马区神经元NF-κB的表达明显增加，与正常对照组相比差异有显著性(P＜0.05)。结论 NF-κB在糖尿病大鼠海马神经元表达增加表明其在慢性糖尿病脑损伤病理过程中起着非常重要的作用。
【关键词】 糖尿病；NF-κB
【Abstract】 Objective To study the expression of NF-κB in neurol cell damage in diabetic rat’s hippocampus.Methods Diabetic group consisted of 10 rats of 6 weeks old with fasting blood glouse(FBG) higher than 16.8mmol/L and normal group consisted of 10 normal wister rat with FBC lower than 6.0mmol/L.Rat were killed at 14 weeks old and observe the expression of NF-κB in hippocampus neuronal.Results The expression of NF-κB increased in diabetes group.The increases of NF-κB were positively correlated(P＜0.05).Conclusion NF-κB may play an important role in the neurol damage in hippocampus of diabetic rat.
【Key words】 diabetes；NF-κB
近年来，随着糖尿病人群中老年痴呆发病率的日益增多，人们对糖尿病引起的脑组织损伤这一事实也越来越重视。其主要表现为痴呆及精神疾患等慢性脑病的症状。本研究以糖尿病动物模型为研究对象观察NF-κB在海马神经元中表达，来探讨糖尿病引发的中枢神经系统损伤的机制。
1 材料与方法
1.1 材料 (1)动物：Wister大鼠20只(中国医科大学动物所)体重(150±20)g。(2)仪器：Olmps显微镜，MIAS-2000型图形分析仪。(3)试剂：兔抗NF-κBp65多克隆抗体(武汉博士德公司)，链脲左菌素(STZ)(Sigma)，ABC试剂盒(武汉博士德公司)。
1.2 模型制备 大鼠禁食6h，以pH＜4.6，0.1mmol/L枸橼酸钠缓冲液溶解链脲佐菌素(STZ)成1%溶液［1］，以60mg/kg腹腔注射，48h后测全血血糖(One Touch Ⅱ血糖仪)≥167mol/L时纳入实验组，以后不予特殊治疗，也不进行糖尿病饮食控制，每2周剪尾测血糖、体重。
1.3 分组与处理 将雌性Wister大鼠20只按体重随机分组，一组10只制备糖尿病模型，糖尿病成模后60天取脑组织海马区行免疫组化检测。
1.4 检测指标
1.4.1 组织切片的制备 成模大鼠及正常对照组以4%多聚甲醛心内灌注固定后取出大脑。沿冠状位额极后7～10mm将大鼠脑组织切成5mm厚度的组织块。低温石蜡包埋。连续冠状切片厚约5μm。做HE染色，光镜下观察病理变化。
1.4.2 免疫组织化学 按ABC试剂盒说明，取石蜡白片按程序脱蜡，微波抗原修复，正常山羊血清封闭，加入大鼠NF-κBp65抗体37℃孵育1h(50μl/片，稀释度1：100)置于4℃冰箱孵育24h，用0.01M PBS替代一抗做为阴性对照；辣根过氧化酶(HRP)标记的链霉卵白素工作液孵育37℃ 1h，少量暗环境下显色，显微镜下观察显色程度，以计算机图像分析仪MPIAS-500检测积分吸光度值。
2 结果
2.1 一般观察 糖尿病组大鼠呈明显多饮、多尿、多食，体重下降，皮毛污秽无光泽，成模1个月后即出现行动迟缓，而正常对照组无三多一少症状，生长与营养状况良好。
2.2 血糖与体重 见表1。
表1 血糖与体重 (x±s) 
2.3 光镜观察与免疫组化 糖尿病组神经元细胞大小不一，形态有所改变，呈梭形、三角形、不规则形。神经元细胞既有肿胀，也有皱缩。正常对照组免疫组化显示NF-κB一直存在于胞浆，无明显的核移位，细胞完整排列整齐，无变形。NF-κB免疫组化结果0.272±0.04。糖尿病组大鼠海马区神经细胞皱缩，核浓染，NF-κB明显从细胞浆移位于胞核。NF-κB免疫组化结果(0.281±0.03)与正常对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。见图1A～2B。 
图1A 正常对照组NF-κB在海马区齿状回神经元的表达(20倍) 
图1B 慢性糖尿病大鼠组NF-κB在海马区齿状回神经元的表达(20倍) |
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