作者：张玉环，陈保疆，焦振山

【摘要】  目的  探讨脾虚湿盛型异位性皮炎(AD)和支气管哮喘(AS)患者外周血细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA表达的临床意义。方法  对102例(AD 61例， AS 41例)患者的外周血5ml应用反转录系统试剂盒及核酸测定仪进行吸光度测定。结果  两组患者IFN-γ mRNA阳性表达显著低于对照组(P<0.01)，但IL-4 mRNA与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。AD和AS IFN-γ mRNA阳性表达率，IL -4 mRNA阳性表达率比较两组之间差异无显著性(P>0.05)。结论  异病同证指几种不同疾病，在疾病过程中出现了大致相同的病理，大致相同的证，脾虚湿盛型的AD与AS均显示免疫失衡状态。

    【关键词】  异位性皮炎  支气管哮喘  干扰素γ  白细胞介素4

    mRNA expression of IFN-γ and IL-4 in patients with atopic dermatitis and asthma

       【Abstract】  Objective  To investigate the significance of the mRNA expression of IFN-γ and IL-4 in the atopic dermatitis(AD) and asthma(AS) patients who were diagnosed deffciency of spleen with overabundance of damp according to the traditional Chinese medicine theory.Methods  The peripheral blood was collected in 102 cases(AD 61 cases，AS 41 cases)， analyzed the mRNA expression of these cytokine using RT-PCR system kit.Results  Compared with the control group， the mRNA expression of IFN-γ in AD and AS patients were both significantly decreased (P<0.01)，and IL-4 had no statistical significance(P>0.05) .However， the expression of IL-4 and IFN-γ had no significant difference between AD and AS (P>0.05).Conclusion  There are both immune imbalance in AD and AS， the abnormal mRNA expression of IL-4 and IFN-γ are part of immune profile in AD and AS patients who were diagnosed deficiency of spleen with overabundance of damp.

    【Key words】  atopic dermatitis  asthma  IFN-γ  IL-4

    异位性皮炎(atopic dermatitis，AD)和支气管哮喘(asthma，AS)均属于Ⅰ型变态反应性疾病，脾虚湿盛是两种疾病临床常见的中医证型，临床表现的“证候”大多相同，中医病机一致。本文对102例(AD 61例，AS 41例)患者的外周血细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA表达进行检测，探讨中医脾虚湿盛型AD与AS mRNA在细胞因子表达的临床意义。

    1  资料与方法

    1.1  临床资料  102例患者来自2002年1月～2004年2月天津市长征医院变态反应科门诊，AD患者61例，其中男35例，女26例，年龄4～24岁，平均(13.6±9.8)岁，病程(1.5～ 11.5)年，平均(5.4±3.7)年；AS患者41例，其中男24例，女17例，年龄12～38岁，平均(16.4±8.3)岁，病程1～10.5年，平均(6.5±3.6)年。对照组20例，为志愿献血者，其中男12例，女8例，年龄18～23岁，平均(20.7±4.3)岁。

    1.2  诊断标准  AD诊断标准参照1994年美国Williams等提出的AD诊断标准［1］。AS诊断标准参照中华医学会呼吸病学分会1997年《支气管哮喘防治指南》［2］。脾虚湿盛证参照中医诊断学标准［3］。

    1.3  主要仪器与试剂

    1.3.1  主要仪器  PCR仪(PTC-200型MJ Research公司，美国)；超净工作台(苏净公司，苏州)；台式高速离心机(Eppendorf公司，德国)；核酸自动测定仪(Eppendorf公司，德国)；电泳仪(北京六一仪器厂)；凝胶自动成像系统(UVP，美国)。

    1.3.2  主要试剂  反转录系统试剂盒(美国PROMEGA公司)；DEPC液(Sigma公司)；氯仿，异丙醇(天津化学试剂厂)；引物序列来源于文献［3］。

    1.4  实验方法  单个核细胞总RNA提取：取患者和正常对照组空腹静脉血5ml，肝素抗凝，在5ml淋巴细胞分离液面上加入等量处理后的血液样本，离心，分离单个核细胞。采用核酸测定仪在260nm和280nm波长下对样品进行吸光度测定，以确定RNA提取的质量，OD260／280在1.8～2.0视为提取的RNA纯度较高。

    2  结果

    2.1  外周血单个核细胞总RNA提取结果  琼脂糖凝胶电泳后可以清楚地看到所提取的总RNA的28S和18S两条清晰的 rRNA条带，这说明提取的总RNA完整，无明显降解，见图1。

   
图1  提取RNA电泳图

    2.2  RT-PCR结果  用图像分析仪对胶片上每一泳带进行光密度扫描，结果用各细胞因子检出阳性率表示。见图2，图3。