作者：李卓能，罗 琼，杨明亮，闫 俊，庞雅琴，姜 鸣
【摘要】 目的 研究枸杞多糖对诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 体外培养的人前列腺癌PC-3细胞经枸杞多糖作用后，采用MTT法测定细胞的增殖情况。采用TUNEL观察PC-3细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测其Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 一定剂量的枸杞多糖可明显抑制PC-3细胞的生长，并能诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡，凋亡率为41.5%，同时PC-3细胞Bcl-2/Bax蛋白比值显著下降，呈明显的剂量/效应关系。结论 枸杞多糖能诱导人前列腺癌PC-3细胞的凋亡，其机制与调节人前列腺癌PC-3细胞Bcl-2和Bax蛋白表达有关。
【关键词】 枸杞多糖；人前列腺癌细胞；细胞凋亡；Bcl-2；Bax
【Abstract】 Objective The aim of this study was to investigate the influence of Lycium barbarum polysaccharides (LBP) on human prostatic cancer cell line PC-3 and its Bcl-2 and Bax expression.Methods We cultured human prostate cancer PC-3 cell in vitro and added the LBP to the medium at different concentrations. the MTT assay was used to measure the proliferation of PC-3 cell. TUNEL was used to investigate the effects of LBP on PC-3 cell apoptosis and immunohistochemical technique was used to detect the Bcl-2 and the Bax expression.Results LBP could inhibit the growth of PC-3 cell line. LBP can induce apoptosis and the apoptosis rate is 41.5%，the ratio of Bcl-2/Bax protein decreased significantly with a dose-effect relationship.Conclusion LBP inhibits PC-3 cell line independent of androgen in vitro， and the mechanisms may be related to its influence on the cell cycle and inducing of apoptosis.
【Key words】 lycium barbarum polysaccharide；human prostatic cancer cell；apoptosis；Bcl-2；Bax
随着经济水平的提高，生活方式的改变和人均寿命的延长，前列腺癌的发病率有日益增多的趋势［1］，我国前列腺癌的发病率约为2.41/10万男性人口［2］。枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharides，LBP）是枸杞子（Fructus Lycii）的提取物，具有多种药理作用和生物活性功能［3］及抗肿瘤功能［4］，并能诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡从而抑制其增殖［5］。然而其诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制还不明了。本文拟进一步探讨枸杞多糖对人前列腺癌PC-3细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响，以探讨枸杞多糖抗前列腺癌的可能机制。
1 材料与方法
1.1 试品及试剂
1.1.1 枸杞多糖 由本实验室制备。
1.1.2 细胞株及培养条件 雄激素不依赖型人前列腺癌细胞株PC-3由华中科技大学同济医学院提供，在含体积分数为10%的小牛血清中加入双抗的F12培养液(Ｇｉｂｃｏ)，37℃，5%CO2培养。
1.2 方法
1.2.1 实验分组及处理 实验设1个空白对照组和5个不同浓度实验组，分别为LBP 100μg/ml、LBP 200μg/ml、LBP 400μg/ml、LBP 800μg/ml和LBP 1000μg/ml。取对数生长期的PC-3细胞1×104个/ml接种于25ml的培养瓶培养， 24h后加入前述不同浓度的LBP，作用48h后，胰酶消化离心，将细胞悬浮于PBS中，调浓度为1×106个/ml细胞悬液，备用。
1.2.2 原位末端标记法(TUNEL) 由武汉博士德公司提供TUNEL检测试剂盒。光镜下，胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡细胞。随机计数200个细胞，算出阳性细胞率。
1.2.3 Bcl-2和Bax蛋白检测 按成套Bcl-2和Bax蛋白免疫组化染色试剂盒(武汉博士德公司)说明操作。光镜下观察胞浆、胞膜出现棕褐色的为阳性细胞，随机计数200个细胞，算出阳性细胞率。
1.3 数据统计 所有的数据均用x±s表示，采用SPSS软件包分析数据，各组间指数的比较采用单因素方差分析和t检验。
2 结果
2.1 枸杞多糖对人前列腺癌PC-3细胞生长的抑制作用 不同浓度的枸杞多糖对体外培养的PC-3细胞有抑制作用，并随剂量的增加其抑制作用加强，最大抑制率可达到87.84%。100μg/ml与200μg/ml组，与对照组比较差异有显著性P＜0.05；400μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml组，与对照组比较差异有非常显著性P＜0.01，结果见表1。
表1 枸杞多糖对人前列腺癌细胞PC-3细胞增殖的抑制作用 （x±s）
注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
