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| 作者：李萍，杨莉，熊凡，富青，袁艇 【摘要】 目的 探讨参麦注射液对急性缺血再灌注大鼠心肌细胞抗氧化能力的作用机制。方法 结扎冠状动脉前降支复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，测定心肌组织丙二醛（MDA）含量及结构型、诱导型一氧化氮合酶（cNOS，iNOS ）、 超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、血清肌酸激酶（CK）的活性。结果 SM组心肌组织cNOS、SOD、GSH-Px活性高于MI/R组（P<0.01），MDA含量、iNOS及血清CK活性低于MI/R组（P<0.01）。结论 参麦注射液保护心肌缺血再灌注损伤的作用与其提高心肌抗氧化能力、清除氧自由基、减轻细胞膜脂质过氧化状态和维持细胞膜的完整性相关。
【关键词】 参麦注射液；心肌缺血再灌注；抗脂质过氧化；大鼠
Effect of on antioxidative ability of cardiomyocytes after acute ischemia-reperfusion in rats
【Abstract】 Objective To observe the effect of Shenma injection on antioxidative ability of cardiomyocytes after acute ischemia-reperfusion in rats.Methods The ischemia-reperfusion heart model was established by ligating/loosening the left anterior descending branch of coronary artery in Wistar rats. The activitie of cNOS， GSH-Px ，SOD and the content of MDA， in the myocardium and CK activity of serum were examined.Results The activitie of cNOS， GSH-Px，SOD was increased significantly in the Shenma group as compared with that of ischemia-reperfusion group (P<0.01). CK，iNOS activity and MDA content were decreased significantly in the Shenma group.Conclusion The results suggested that the protected effects of Shenma injection on the myocardial ischemia-reperfusion injury may be reiated to its actlon of scaverging the oxygen free radicals，protecting the antioxygen free radical enzymes and inhibiting the lipid peroxidation in the myocaydium.
【Key words】 shenma injection；ischemia-reperfusion；NOS；GSH-Px；SOD；MAD；CK
冠状动脉缺血引起缺血性心脏病是心血管系统疾病的主要死亡原因，临床治疗主要是解除冠脉痉挛，恢复血流供应，这又使心脏经历一个缺血后恢复灌流的过程 ， 有可能引起细胞死亡或进一步功能障碍。设法解除或减轻再灌注损伤成为此类心脏病防治研究的重点。临床研究已证实［1］参麦注射液(Shenma injection，SM) 能减轻急性心肌梗死患者溶栓后再灌注损伤，本实验通过结扎/松解左冠状动脉前降支复制心肌缺血再灌注模型，以心肌组织cNOS、iNOS、GSH-Px、SOD、MAD及血清CK的水平变化反映心肌受损程度，并用SM干预，探讨SM抗心肌细胞脂质过氧化的作用机制，以此为中医药防治缺血再灌注损伤的应用，加强心肌保护提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料和动物分组
1.1.1 实验仪器和试剂 ECG-6511型心电图仪（上海医疗器械厂）； TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；数显恒温水浴锅（金坛市富华仪器有限公司）；结构型、诱导型一氧化氮合酶（cNOS，iNOS）、脂质过氧化物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）双缩脲法蛋白定量试剂盒（南京建成生物工程研究所），肌酸激酶（CK）试剂盒（北京化工二厂）；参麦注射液(SM杭州正大青春宝药业有限公司）。
1.1.2 实验动物及分组采用健康成年Wistar大鼠32只，雌雄不限，体重180～240g，本院实验动物部提供。适应性喂养3天后心电图阴性者作为实验对象。动物随机分为假手术（Sham）组、缺血（MI）组、缺血再灌注（MI/R）组、参麦（SM）组，每组6只。
1.2 动物模型的制作 20%乌拉坦腹腔注射麻醉（7ml/kg），用针形电极插入四肢皮下，观察记录标准肢体Ⅱ导联心电图。气管切开，呼吸机人工呼吸，呼吸频率80次/min，开胸暴露心脏，于左心耳下缘约1mm处用6号医用缝针和0号医用缝线穿过心肌浅层作一结扎线，稳定10min左右行实验处理。各组手术步骤：Sham组：穿线不结扎，旷置25h；MI组：在穿线间置宽3mm橡皮条，双活结结扎左冠状动脉前降支，以心电图S-T段明显上抬，结扎线以下心肌颜色变暗为心肌缺血标志，缺血30min；MI/R组：如缺血30min方法处理，缺血30min后松开结扎线，恢复再灌注120min；SM组：在结扎左冠状动脉前降支前3天，每日腹腔注射2ml（含参麦0.4g）参麦注射液，而后处理同缺血再灌注组。以上各组动物实验完毕，摘除眼球采血备检，同时摘取心脏。
1.3 标本采集及检测方法
1.3.1 CK的检测 上述各组动物摘除眼球采血1ml后立即置入加有20μ1EDTANa2和10μl抑肽酶的预冷离心管内充分混匀、4℃下3500r/min，离心5min，吸取管内上清液密封后于-20℃低温冰箱保存待测。
1.3.2 cNOS、iNOS、GSH-Px、SOD、MDA的检测实验完毕，摘除部分结扎线以下左心室心肌，置于冰冷的生理盐水冲洗，除去血液，滤纸试干，分析天平称取0.2g心肌组织，放入5ml小烧杯内，用刻度吸管加入组织块重量9倍的生理盐水，制备成10％的组织匀浆，倒入离心管中，3000r/min离心15min，取上清液-20℃低温冰箱保存待测。按照试剂盒说明测定心肌组织NOS、SOD、GSH-Px的活性及MDA含量。
1.4 统计学处理 全部数据均以x±s表示，组间比较用方差分析，二组间比较用q检验。
2 结果
2.1 血清CK活性及心肌组织MDA含量的变化除Sham组未检测到CK活性外，CK活性及MDA含量于MI组增加，MI/R组达高峰，SM组降低。MI/R组与各组间有高度统计学意义。4组变化见表1。
2.2 心肌组织SOD、GSH-Px活性的变化心肌组织SOD、GSH-Px活性于MI组开始降低，MI/R组降至最低，SM组SOD、GSH-Px活性增加，但低于Sham组，SM组GSH-Px活性于各组间具有统计学意义，但SOD与MI组差异无显著性。4组变化见表1。
2.3 心肌组织中cNOS、iNOS活性的变化 结果显示，MI/R组iNOS活性显著高于其他各组，cNOS活性则显著低于其他各组。SM组cNOS活性显著低于Sham组、MI组；iNOS活性显著高于Sham组（P<0.01）。4组变化见表1。 |
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