2.1.4 动物分组 动物购回后,取体重160~200g健康SD大鼠60只,按体重随机分为正常对照组(不致敏)、模型组(要致敏)、三物黄芩颗粒大剂量组、中剂量组、小剂量组、阳性对照组6组,每组10只,雌雄各半。 2.1.5 给药方法 正常对照组及模型组给予1ml/100g生理盐水,各组均以1ml/100g体重体积灌胃给药,每日1次,连续7天。 2.1.6 观察指标及测试方法 实验第1天,除正常对照组外,用卵白蛋白生理盐水溶液按10mg/kg肌内注射于后腿两侧,同时腹腔注射百日咳疫苗2×1010/只,各组按给药方法灌胃7天。第13天(IgE高峰时间),处死动物采血,血液低速离心,分离血清,送成都中医药大学附属医院放免科测血清总IgE含量。 2.1.7 实验结果 见表2。表2 三物黄芩颗粒对致敏大鼠血清IgE含量的影响 (x±s) 
由表2可见,空白组与模型组比较差异有显著性(t检验,P<0.05),说明造模成功。三物黄芩颗粒大、中、小剂量组连续灌胃给药7天,能够减低致敏大鼠血清中总IgE含量,其中大剂量组与模型组比较差异有显著性(P<0.05),说明三物黄芩颗粒大剂量组能够明显减低致敏大鼠血清中总IgE含量。 2.2 大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒实验 2.2.1 实验动物 SD大鼠,雌雄各半,体重(180±20)g,四川省医学科学院实验动物中心提供,并配给饲料。合格证号:川实动管质99-32。 2.2.2 实验阳性药物和试剂 强的松片、苦味酸、1%卵白蛋白、百日咳三联疫苗同前。0.5%伊文思蓝溶液:中国医药集团上海化学试剂公司生产,批号F20020913。 2.2.3 实验仪器、设备 ACS-3H-B电子秤:中山市金利电子衡器有限公司;LG10-2.4型离心机:北京医疗仪器修理厂制造。 2.2.4 动物分组 动物购回后,取体重 160~200g健康SD大鼠24只,按体重随机分为空白组(不用药,不注射抗血清,只进行抗原攻击:大鼠头部皮下注射0.5%伊文思蓝溶液1ml,内含卵白蛋白1mg)、模型组(不用药,但注射抗血清,进行抗原攻击)、西药组(注射抗血清,进行抗原攻击)、中药小剂量组(小剂量组,注射抗血清,进行抗原攻击)、中药中剂量组(中剂量组,注射抗血清,进行抗原攻击)、中药大剂量组(大剂量组,注射抗血清,进行抗原攻击)6组,每组4只,雌雄各半。 2.2.5 给药方法 空白组给予生理盐水,各组均以1ml/100g体重体积灌胃给药,每日1次,连续7天。 2.2.6 观察指标及测试方法 制备抗血清:另取健康SD大鼠4只,体重160~200g,用卵白蛋白生理盐水溶液按10mg/kg肌内注射于后腿两侧,同时腹腔注射百日咳疫苗2×1010/只。第13天(IgE高峰时间),处死动物采血,血液低速离心,分离血清,此血清置冰箱备用。正式实验:(1)各组按给药方法灌胃7天;(2)第6天,接种抗血清,除空白组外,其余5组大鼠头部皮下注射稀释成 1∶20大鼠抗血清0.1ml;(3)第8天进行抗原攻击,30min后断头处死。取颅骨,经脱水、固定、染色后,流水冲洗,细心剥离颅骨骨膜,展于载玻片晾干,在光镜下进行形态学观察并拍摄照片。 2.2.7 实验结果及分析 显微镜下拍摄实验大鼠颅骨骨膜贴片,可见空白组实验大鼠颅骨骨膜血管周围的肥大细胞几乎无脱颗粒现象;而模型组有大量肥大细胞脱颗粒现象,且可见细胞破裂,说明造模成功。西药组(30mg/kg)和中药大、中、小剂量组有一定程度的肥大细胞脱颗粒现象,均明显少于造模组。4个治疗组比较,肥大细胞脱颗粒现象最少为西药组,其次为大、中、小剂量组。说明三物黄芩颗粒能抑制肥大细胞脱颗粒,但作用弱于强的松。 3 结论 本课题利用Ⅰ型变态反应动物模型,研究了三物黄芩颗粒的抗过敏作用,结果该颗粒能有效对抗Ⅰ型变态反应,具有良好的抗过敏作用。其大、中剂量连续给药7天,对 1∶30、1∶40、1∶50三种不同稀释度的抗血清能非常显著地抑制大鼠背部皮肤蓝色反应斑的直径(P<0.05)。该颗粒能有效作用于实验性Ⅰ型变态反应的三个作用环节,发挥抗过敏作用,明显减低致敏大鼠血清中总IgE含量,大剂量组与模型组比较差异有显著性(P<0.05)。在显微镜下拍摄实验大鼠颅骨骨膜贴片,可见大、中、小剂量组有一定程度的肥大细胞脱颗粒现象,且均明显少于对照组,说明三物黄芩颗粒能抑制肥大细胞脱颗粒,但作用弱于西药组。 |