作者：张剑平，徐克沂，高燕菁，樊文梅，魏红山，徐道振，陆蕴茹

【摘要】  目的  探讨人参、甘草体外诱导人外周血单个核细胞（PBMC）分泌细胞因子机制。方法  我们选择生晒参、红参、甘草三种中药的提取液加入PBMC培养液中，孵育5d后，采用ELISA方法测定上清液中的细胞因子水平。结果  生晒参、红参、甘草能诱导PBMC分泌细胞因子和SIL-2R，其中药组TNF-α、SIL-2R、IL-2、IFN-γ含量明显高于细胞对照组，特别是生晒参诱生PBMC高分泌IFN-γ尤为突出。结论  生晒参、红参、甘草对体外诱导PBMC分泌TNF-α、IL-2、IFN-γ细胞因子和SIL-2R。

    【关键词】  生晒参  红参  甘草  PBMC  细胞因子

Studies on the role of induced cytokines，SIL-2 by ginseng and glycyrrhiza in PBMC

        【Abstract】  Objective  In order to elucidate the role of ginseng and glycyrrhiza in cellular immunity regulation and study the mechanism of induced cytokines by the Chinese medicines in vitro.Methods  PBMC were induced by water-solubility extract respectively from radix ginseng，radix ginseng rubra and glycyrrhiza， and cytokines levels was assayed by the methods of ELISA.Results  Radix ginseng，radix ginseng rubra and glycyrrhiza could induce high levels of cytokines. The levels of TNF-α，SIL-2R，IL-2 and IFN-γ among the group of Chinese medicine were significant higher than that of control group， especially high-level production of IFN-γ induced by radix ginseng.Conclusion  Radix ginseng，radix ginseng rubra and glycyrrhiza play a role of positive regulation for immunity system in vitro as immunopotentiator. Radix ginseng was stronger than the radix ginseng rubra and glycyrrhiza， but they have a different mechanism of immune regulation.

    【Key words】  radix ginseng  radix ginseng rubra  glycyrrhiza  PBMC  cytokines

    近年来有关人参、甘草调节免疫功能的研究已有许多报道［1］，但对其体外诱导PBMC分泌细胞因子和SIL-2R很少报道。本实验人参、甘草诱导外周血单个核细胞的细胞因子和SIL-2R分泌的调节作用。

    1  材料与方法

    1.1  材料
   
    1.1.1  生晒参、红参、甘草标准品  购自中国药品生物制品检定所。

    1.1.2   诱生细胞  本院职工健康献血员。

    1.1.3  TNF-α检测试剂  美国Genzyme公司。

    1.1.4  淋巴细胞分离液  中国医学科学院天津血液病研究所。

    1.1.5  IMDM营养液  美国GIBCO公司。

    1.1.6  IL-2（白细胞介素Ⅱ）检测试剂盒  美国Biosos公司。

    1.1.7  IFN-γ（干扰素-γ）检测试剂盒  美国Biosos公司。

    1.1.8  SIL-2R检测试剂盒  白求恩医科大学免疫教研室。

    1.2  方法

    1.2.1  中药制备  取生晒参、红参、甘草标准品各5g，分别加入双蒸水50ml，浸泡24h，加热回流2h，用中性滤纸过滤，置4℃冰箱沉降24h。4℃ 14000rpm离心10min，弃沉淀物，将上清液除菌，分装，4℃保存备用。

    1.2.2  分离PBMC  取肝素抗凝血50ml，用无Ca2+，Mg2+，Hank’s液将抗凝血1：1稀释后，缓慢加在淋巴细胞分离液上，抗凝血与无Ca2+，Mg2+，Hank’s液和淋巴细胞分离液的比例为1：1：1， 1700rpm离心20min，吸取淋巴细胞层，加入无Ca2+、Mg2+，Hank’s液混匀洗涤，1300rpm离心10min，弃上清，重复洗涤2次。进行细胞计数后，备用。

    1.2.3  细胞因子诱生  以细胞浓度2.5×106/孔置入24孔细胞培养板，实验组分别加入用IMDM营养液按一定比例稀释的生晒参、红参和甘草无菌溶液，对照组分别加入等量IMDM营养液，37℃、5%CO2孵育5d，分别取出培养上清，2000rpm离心10min，弃沉淀物，待检测。

    1.2.4  细胞因子测定  严格按说明书操作测定细胞培养上清中细胞因子水平和SIL-2R。

    1.2.5  统计学方法  应用t检验。