图1  微胶囊超微结构图


图2  微胶囊表面结构图



图3  微胶囊囊壁结构

    2.4  儿茶素微胶囊安全性评价  儿茶素微胶囊急性毒性试验结果:大、小鼠均没有表现出明显的中毒症状;儿茶素微胶囊对大鼠的LD50为6110mg/kg，对小鼠的LD50为5090mg/kg。根据急性毒性分级标准， 儿茶素微胶囊属实际无毒级。

    儿茶素微胶囊亚慢性毒性实验结果: 各组大鼠在试验期内活动、饮食、粪便和皮毛光泽等均未见异常; 实验末各组大鼠肝功能、肾功能、总胆固醇、红细胞计数、白细胞计数等均无统计学差异（P均＞0.05）（见表5）， 其主要脏器系数（g/100g体重或mg/100g体重）差异亦无显著统计学意义（P均＞0.05）（见表6）; 剖检及光镜镜检均未发现实质性病变及有意义的变化， 表明儿茶素微胶囊不会造成明显的病理损伤。2.5  儿茶素微胶囊对肾病综合征大鼠蛋白尿及病理损害的影响  实验初，各组大鼠尿蛋白排泄量无明显差别（P均＞0.05）。阿霉素造模后， 在第二周末均出现了大量蛋白尿， 经电镜检测， 肾小球基底膜可见足突广泛融合， 说明阿霉素肾病模型制备成功。随着周龄的增长， 对照组尿蛋白的排泄量逐渐增加， 从第二周末始， 其它各组大鼠24 h 尿蛋白排泄量均较同时期对照组要高（P均＜0.01）， 差异有非常显著意义，见表1。实验第四周末， 除对照组外， 其它各组大鼠24h 尿蛋白的排泄量均高于激素组， 差异有非常显著意义;与肾病组相比: 其它各组大鼠24h 尿蛋白的排泄量均有不同程度降低， 差异有非常显著意义。实验末， 各组大鼠24h 尿蛋白的排泄量依次为: 肾病组＞儿茶素治疗组＞儿茶素微胶囊治疗组＞激素治疗组＞对照组。儿茶素微胶囊治疗组与儿茶素治疗组24h 尿蛋白的排泄量在第四周末差异无显著意义，但在第六周末差异显著（P＜0.05）。实验第四周末， 与肾病组相比， 激素组大鼠病理积分降低， 差异有非常显著意义（P<0.01），见表8。与激素组相比， 微胶囊组大鼠病理积分虽然增高， 但并没有统计学意义。实验第六周末， 各组大鼠病理积分由高至低依次为: 对照组、肾病组、儿茶素组、微胶囊组、激素组。与肾病组相比， 激素组与微胶囊组大鼠病理积分明显降低， 差异有非常显著意义（P均<0.01）， 与激素组相比， 儿茶素组及微胶囊组大鼠病理积分均增高， 差异有显著意义（P分别<0.01、0.05）， 具体见表8。经相关分析发现:24h 尿蛋白排泄量与肾脏病理积分呈高度正相关（r＝0.827，P＜0.01）。说明儿茶素微胶囊可以通过降低尿蛋白的排泄量， 来减轻肾脏损害， 延缓肾脏病理慢性进展。

    3  讨论

    近二十多年来抗氧化剂的研究与应用取得了飞速的发展， 各种广泛使用的合成抗氧化剂由于其潜在的安全隐患等逐渐受到人们的排斥， 从植物中寻找天然、高效、低毒抗氧化剂成为了目前抗氧化剂发展的一个必然趋势。从目前的研究来看， 天然植物抗氧化剂中绝大部分都是多酚类物质， 其中应用得较好的有儿茶素、葡萄籽提取物、迷迭香提取物等。本研究通过体外抗氧化试验表明: 儿茶素对三种主要活性氧的清除能力均比葡萄籽提取物和迷迭香提取物要强。但是， 儿茶素分子中的酚羟基很活泼， 在外界条件下极不稳定， 容易因发生氧化、聚合或缩合等反应， 而失去部分抗氧化活性及其它生物学功能［6］， 且非保护状态下， 其在体内的生物利用率也很低。为了有效解决这一问题， 本文利用喷雾干燥法将其制备成微胶囊， 并对制备工艺进行了初步探索（2004年8月25日申报国家发明专利， 2004年10月22日通过初审，申请号：200410046696.8）。通过电镜观察及安全性评价， 所制备的儿茶素微胶囊不仅具有较好的包埋效果， 而且属于实际无毒级、无任何毒副作用， 表明其可应用于临床研究。

    大量蛋白尿是肾病综合征的主要临床表现， 持续大量蛋白尿可导致肾脏持续损伤， 从而引起肾脏慢性进行性损害， 因此有效控制蛋白尿的排泄是治疗肾脏病的根本所在［7］。另外， 活性氧自由基的过量积聚也是造成肾脏病慢性进展的重要原因［2］。目前临床上治疗肾病综合征的首选药物是糖皮质激素， 然而大量的研究发现若长期使用糖皮质激素可使肾小球入球小动脉阻力下降， 肾小球内压力增加， 改变肾小球对大分子物质的通透性， 增加尿蛋白的排出， 加速肾脏的损伤［8］。近年来， 国内也有学者研究发现糖皮质激素不仅可使患者尿蛋白增加， 尚可引起肾小球滤过率和有效肾血浆流量增加［9］。因此，寻找一种替代或辅助激素治疗途径， 缩短治疗时间、降低糖皮质激素引起的副作用已成为目前临床肾脏病工作者的重要课题之一［10］。本课题组通过儿茶素对大鼠肾病综合征防治机制的研究发现: 儿茶素对于防治肾小球疾病的慢性进展具有较好的作用. 通过进一步系统研究， 观察儿茶素微胶囊对肾病综合征大鼠蛋白尿和肾脏病理积分的影响发现: 儿茶素治疗组、儿茶素微胶囊治疗组和激素治疗组均可在一定程度上降低蛋白尿排泄和肾脏病理积分， 但又存在一定差异， 与游离儿茶素治疗组相比， 儿茶素微胶囊治疗组的疗效更好。这可能与儿茶素微胶囊在大鼠体内的稳定性和生物利用率比游离儿茶素要好有关。这些研究结果为利用儿茶素微胶囊防治临床肾病综合征提供了理论与试验依据， 也为研发肾病治疗药物提供了一条新的途径。
　
　表5  儿茶素微胶囊对大鼠血液生化指标的影响  （±s，n=10）

 
   表6  儿茶素微胶囊对大鼠脏器系数的影响  （±s， n=10）


   注:与对照组比较，其它各组P均＞0.05

    表7  五组大鼠不同时期24h尿蛋白的排泄量  （mg/d，±s，n=10）

   
　 表8  五组大鼠不同时期肾脏病理积分  （±s，n=10）

  

【参考文献】

    1  Chen K， Plumb GW， Bennett RN，et al.Antioxidant activities of extracts from five anti-viral medicinal plants. J Ethnopharmacol，2005，96:201-205.
    2  Nakakura H， Ashida A， Hirano K，et al. Oxidative stress in a rat model of nephrosis can be quantified by electron spin resonance. Pediatr Nephrol，2004，19: 266-270.
    3  王少敏， 李萍， 赵明强.生物化学发光法测定酸枣仁的抗氧化活性.中草药，2003，34: 417-419.
    4  张均田. 现代药理实验方法（下册）. 北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社， 1998， 1810-1827.
    5  何小解， 易著文， 何庆南，等.儿茶素对肾病大鼠血浆及肾皮质内皮素、一氧化氮表达影响的研究. 中华儿科杂志，2002， 40: 550-554.
    6  杨贤强， 王岳飞， 陈留记. 茶多酚化学. 上海: 上海科学技术出版社， 2003.
    7  陈述枚， 莫樱. 持续性大量蛋白尿在小儿肾病慢性进展中的作用. 中国实用儿科杂志，2002，17: 520-522.
    8  Leonard MB， Feldman HI， Shults J，et al. Long-term， high-dose glucocorticoids and bone mineral content in childhood glucocorticoid-sensitive nephrotic syndrome. N Engl J Med，2004，351: 868-875.
    9  莫樱， 陈述枚. 糖皮质激素加重某些肾病综合征蛋白尿的机制探讨. 中华儿科杂志，1998，36: 753.
    10  叶建伟， 丁洁， 黄建萍，等.糖皮质激素受体基因多态性与肾病综合征患儿激素耐药相关性探讨. 中华儿科杂志，2003，41: 661-665.