A  基质对照MC(X8400)
B  2．5％烟酰胺MC(X8400)
C  5．0％烟酰胺MC(X8400)
D  10％烟酰胺MC(X8400)
图3  烟酰胺对黑素细胞超微结构的影响

    3  讨论
   
    烟酰胺与烟酸统称为维生素ＰＰ（维生素Ｂ３），是辅酶Ⅰ、Ⅱ的重要组成部分，在生物氧化过程中起递氢作用，促进生物氧化和组织新陈代谢［4］。研究表明烟酰胺具有抗炎活性，能促进紫外线等诱导的DNA损伤修复，抑制UVB辐射的光致癌性，在临床上早已被广泛用于糙皮病、持久性隆起红斑、痤疮等皮肤病［5］。近年烟酰胺的延缓皮肤衰老和美白功能也开始受到重视，国外已有在防晒剂中加入烟酰胺来达到防晒效果［1］。
   
    烟酰胺是在光线、空气中性质最稳定的水溶性维生素，而且对皮肤刺激最小［5］。毒理实验发现其小鼠经口LD50为（2.5～3.5）g/kg，大大超过临床使用剂量，而“三致”实验均为阴性，现已被美国FDA认作安全药物［4］。Franz做烟酰胺经皮吸收研究发现其平均弥散百分数为11％［4］。以上优点说明烟酰胺外用有减少色素沉着可能，关键在于烟酰胺是否有减轻色素沉着的效果。
   
    由于棕黄色豚鼠体内黑素细胞、黑素小体在毛囊、表皮的分布类似于人体（尤其是亚洲人）中的分布，其致黑模型应用最为广泛［3，6］。不过，现有的紫外线诱导色素沉着的动物模型在建模过程中，多以大于最小红斑剂量（MED）的UVB在短期内连续照射，皮肤红斑、蜕皮等皮肤损伤难以避免［3，6］。人体的自然晒黑过程通常不伴肉眼可见的皮肤损伤，因此为更好地模拟人体致黑情况，本文采用小剂量多次重复UVB照射致黑动物模型，在照射过程中，豚鼠皮肤无潮红、红斑、脱屑等急性损伤。
   
    用药期间，涂抹基质的皮肤于用药1周时，L值降至最低（图2），皮肤黑度达到最高峰，随后L值逐渐回升，其余三个烟酰胺浓度组的L值变化也呈现相似的趋势。用药2周时，5％烟酰胺已开始抑制皮肤的色素沉着；用药4周实验结束时，涂抹5％烟酰胺与10％烟酰胺皮肤L值已经大于用药前L值，美白效果十分明显，只是这2个有效浓度引起的皮肤L值改变差异无显著性（图2）。肉眼观察和通过图像分析法对Masson－Fontana染色切片黑素含量的测定分析结果与用药后皮肤L值改变情况相符，从不同角度说明了烟酰胺具有较为肯定的美白效果。
   
    皮肤色素沉着程度主要决定于以下几个因素：（1）酪氨酸酶、多巴色素互变酶（TRP-2）、二羟基吲哚羧酸氧化酶(TRP-1)等活化调节黑素细胞内黑素合成；（2）黑素细胞增殖；（3）黑素小体向角质形成细胞的转运和降解；（4）角质形成细胞的新陈代谢速度等。通常，美白剂都是通过影响上述一个或多个因素发挥作用。
   
    目前，学术界对于烟酰胺是否能抑制黑素细胞增殖存在争议：日本学者T. HAKOZAKI等［1］认为烟酰胺对黑素细胞增殖没有影响；帕它木等［7］以不同浓度烟酰胺处理人皮黑素细胞发现随烟酰胺浓度增加、作用时间的延长，抑制黑素细胞的增殖作用明显增强。但现有的关于烟酰胺美白机制的探讨都局限在细胞水平，离体细胞毕竟不能反映人体的全部特征，从细胞外推到人体，需要一个很重要的步骤—动物实验。本次动物实验对涂抹烟酰胺的皮肤组织活检Dopa染色的结果显示5％和10％烟酰胺均可明显减少位于表皮基底层的、具有黑素合成功能的活性黑素细胞数。由于在紫外线辐射下，角质形成细胞分泌的细胞因子对于黑素细胞的功能状态影响较大，如Imokawa等［8］研究发现紫外辐射诱导表皮中IL-1增多，IL-1可以促进角质形成细胞中内皮素的释放，而内皮素反过来又可促进黑素细胞的分裂增殖，所以，即使离体细胞结果与本次动物实验结果有差异，考虑是由于角质形成细胞和黑素细胞间的相互作用引起的。
   
    此外，有研究表明烟酰胺在体外和活体都可以抑制活性氧族（ROS）的形成［9］，也有研究表明由紫外线辐射诱导产生的ROS［10］，并促进表皮黑素细胞的黑素合成［11］，因此烟酰胺也可能通过抑制黑素细胞内的黑素合成发挥作用。于是，本文在透射电镜下观察用药4周皮肤组织超微结构的改变，结果表明与基质组皮肤相比，外用5％烟酰胺的皮肤表皮黑素细胞中Ⅲ、Ⅳ期黑素小体明显减少。因此考虑抑制黑素细胞也是烟酰胺的作用途径之一。
   
    总之，外用烟酰胺对紫外线致黑的豚鼠皮肤有明显的抑制色素沉着的作用，5％的烟酰胺为适宜添加浓度，它的美白效果主要是通过抑制黑素细胞的增殖和黑素细胞内黑素小体的合成发挥作用。

【参考文献】

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    2  贾爱群，孙洋，王建新.美白剂的发展现状及其黑色素抑制机理的研究进展. 日用化学工业，2001，31(1)： 41-44.    
    3  Hideya Ando， Atsuko Ryu， Akira Hashimoto. Linoleic acid and α-linolenic acid lightens ultraviolet-induced hyperpigmentation of the skin. Arch Dermatol Res， 1998， 290：375-381.    
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    5  Mohammad Reza Namaz. Nicotinamide-containing sunscreens for use in Australasian countries and cancer-provoking conditions. Med Hypotheses， 2003， 60(4)：544-545.    
    6  Jun Yamakoshi， Fujio Otsuka， Fujio Otsuka， et al. Lightening effect on ultraviolet-induced pgmentation of guinea pig by oral administration of a proanthocyanidin-rich extract from grape seeds. Pigment Cell Res， 2003，16： 629-638.    
    7  帕它木，潘建英，洪新宇，等.烟酰胺抑制人皮黑素细胞的适宜浓度研究.日用化学工业， 2004， 34 (5)：296-299.    
    8  Yada Y， Higuchi K， Imokawa G. Effects of endothelins on signal transduction and proliferation in human melanocyte. J Biol Chem， 1991， 266：18352.
    9  Sandler S， Andersson A. Long-term effects of exposure of pancreatic islets to nicotinamide in vitro on DNA synthesis， metabolism and B-cell function. Diabetologia， 1986，29：199-202.    
    10   Horikoshi T， Nakahara M， Kaminaga H， et al. Involvement of nitric oxide in UVB-induced pigmentation in guinea pig skin. Pigment Cell Res， 2000， 16：358-363.    
    11  Tomita Y， Hariu A， Kato C. Radical production during tyrosinase reaction，dopa-melanin formation， and photoirradiation of dopa-melanin. J Invest Dermatol， 1984， 82：573-576.